“牛奶發(fā)酵”是產(chǎn)氣莢膜梭菌的重要生化特征之一。我們在操作時會遇到各種問題，導(dǎo)致實驗失敗。下面小編就關(guān)于這項實驗和小伙伴們簡單探討一下，希望能為大家解決這一難題。
“牛奶發(fā)酵”實驗使用含鐵牛奶培養(yǎng)基。
檢驗原理
產(chǎn)氣莢膜梭菌能分解乳糖產(chǎn)酸，使酪蛋白凝固，同時產(chǎn)生大量氣體，將凝固的酪蛋白沖成蜂窩狀，有時可將液面向上推擠，甚至?xí)_開試管帽，稱為“暴烈發(fā)酵”。
操作步驟
1
配制
滅菌溫度和時間嚴格按照標簽要求操作，滅菌后迅速冷卻（宜現(xiàn)用現(xiàn)配）。
2
接種
取生長旺盛的新鮮FTG培養(yǎng)液1ml，深入培養(yǎng)基底部進行接種。
3
培養(yǎng)
46℃±0.5℃水浴培養(yǎng)，水浴培養(yǎng)時確保水面高于培養(yǎng)基液面。
4
結(jié)果觀察
46℃±0.5℃水浴培養(yǎng)2 h后，每小時觀察一次，觀察至5h。
5
結(jié)果判斷
5h內(nèi)不發(fā)酵者為陰性，有“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象者為陽性。
培養(yǎng)基質(zhì)控
（GB 4789.28-2013）
注意事項
1.?菌株生長狀態(tài)
使用生長旺盛的新鮮菌，是實驗成功的關(guān)鍵一步。
FTG培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)果
（左：生長良好；右：空白）
2.
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（FTG）的使用
FTG培養(yǎng)基高壓滅菌后若不及時使用，成分中的刃天青可使氧化層由淺黃色變?yōu)榉奂t色，接種前，觀察培養(yǎng)基氧化層高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/3，否則，使用前需要脫氧。
FTG脫氧方法：100℃水浴加熱至粉紅色消失（不超過20分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。
3.
滅菌
配制含鐵牛乳培養(yǎng)基時，我們常遇到一些滅菌鍋滅菌完成后，需要等待一段時間才能取出培養(yǎng)基，這時，取出的培養(yǎng)基就已經(jīng)是凝固的狀態(tài)，無法使用。
針對這種情況，小編采取三種方式配制含鐵牛奶培養(yǎng)基，模擬可能遇到的不同情況，并進行了接菌實驗：
A
●?加熱煮沸至完全溶解，每個試管分裝10mL培養(yǎng)基，115℃滅菌10min，迅速冷卻后待用。
B
●??加熱煮沸至完全溶解，每個試管分裝10mL培養(yǎng)基，115℃滅菌10min，自然冷卻后待用。（模擬高壓鍋不能及時打開）
C
●采用煮沸滅菌的方法配置培養(yǎng)基，無菌操作下，試管分裝10mL培養(yǎng)基待用（試管需提前滅菌）。
三種滅菌效果的空白管：
接菌實驗結(jié)果：
總結(jié)
采用煮沸滅菌的培養(yǎng)基和嚴格按照標簽滅菌并迅速冷卻的培養(yǎng)基可獲得正確的實驗結(jié)果，若使用已經(jīng)凝固的培養(yǎng)基進行暴烈發(fā)酵實驗，可能導(dǎo)致結(jié)果異常。
4.
儲存
建議儲存條件為陰涼干燥處，開封后盡量做好密封。在配制培養(yǎng)基時，可以先聞一下培養(yǎng)基的氣味，應(yīng)是脫脂奶粉的香氣，如有異味，培養(yǎng)基可能已發(fā)生變質(zhì)，不建議使用。
參考文獻
1、GB 4789.13-2012食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗
2、GB 8538-2016 食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法
3、《中華人民共和國藥典》2020版
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